Taq酶抗體
PCR（Polymerase Chain Reaction, 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是最為成熟、臨床應(yīng)用最廣泛的分子診斷技術(shù)。Taq DNA聚合酶抗體作為熱啟動(dòng)PCR檢測(cè)的重要原料，需求量巨大。 廈門(mén)同仁心生物技術(shù)有限公司（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“同仁心”）自主研發(fā)的雙封閉熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶抗體（專(zhuān)利號(hào)：ZL 2021 1 0548532.9），通過(guò)同時(shí)封閉Taq酶的聚合酶活性及5’-3’外切酶活性，有效提高了擴(kuò)增的特異性及PCR試劑的穩(wěn)定性，并對(duì)不同類(lèi)型的Taq酶具有廣譜結(jié)合能力。疫情期間，同仁心Taq DNA聚合酶抗體累計(jì)銷(xiāo)售1600000mg，可產(chǎn)出超12億人份新冠檢測(cè)試劑，市場(chǎng)占有率高達(dá)20%，性能領(lǐng)先于同類(lèi)產(chǎn)品。
(1)支持全預(yù)混試劑配制，有效提升PCR試劑穩(wěn)定性
將同仁心Taq DNA聚合酶抗體及另外兩種商品化Taq DNA聚合酶抗體分別封閉Taq DNA聚合酶，配置成含引物探針的全預(yù)混液，穩(wěn)定性 測(cè)試條件設(shè)置為：1)4℃放置3、5、7天;2)37℃放置3、5、7天。相同PCR程序上機(jī)，觀察擴(kuò)增曲線和Ct值變化。
穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果詳見(jiàn)圖1(4℃)、圖2(37℃)，可以看出，同仁心Taq DNA聚合酶雙封閉抗體與其它兩款競(jìng)品相比，具有更加優(yōu)秀的穩(wěn)定性， 不同溫度及保存時(shí)間下擴(kuò)增曲線和Ct值無(wú)明顯變化。
(2)有效封閉Taq DNA聚合酶活性，并可快速釋放酶活
將同仁心Taq DNA聚合酶抗體及另外兩種商品化Taq DNA聚合酶抗體，分別與Taq DNA聚合酶按照比例混合后，按照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附錄A的方法測(cè)試酶活，計(jì)算同仁心Taq DNA聚合酶抗體在不同溫度(55℃、65℃)下的封閉效率。
由圖3可知，同仁心Taq DNA聚合酶抗體與Taq 酶的親和力非常高，在65℃下同仁心Taq DNA聚合酶抗體仍然可以封閉Taq 酶的活性，因此能夠更加有效地抑制引物二聚體和非特異性擴(kuò)增。
用同仁心Taq DNA聚合酶抗體封閉Taq酶，并在95℃下熱激30s，檢測(cè)Taq DNA聚合酶活性(參照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附錄A方法)?？梢?jiàn)，95℃熱激30s后，同仁心Taq DNA聚合酶抗體可充分解除封閉，釋放98%的酶活。
(3)有效封閉Taq DNA聚合酶的外切酶活性
將同仁心Taq DNA聚合酶抗體及另外兩種商品化Taq DNA聚合酶抗體，分別與Taq DNA聚合酶按照比例混合后，配置成含引物探針的全預(yù)混液，在37℃放置0、3、5、7天，觀察體系中熒光信號(hào)的變化。
由圖4可以看出，同仁心雙封閉抗體可有效封閉Taq DNA聚合酶的5’-3’外切酶活性。
(4)可封閉多種類(lèi)型Taq酶
用同仁心Taq DNA聚合酶抗體分別封閉三種市面主流廠家Taq DNA聚合酶，封閉比例為1mg：4000U，測(cè)量熒光值以及封閉效率(參照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附錄A方法)。可以看到，對(duì)于市面主流Taq酶，同仁心Taq DNA聚合酶抗體均能有效封閉其活性。
(5)純度高，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶殘留
按照《GB/T 35542-2017 Taq DNA聚合酶》中附錄B、附錄C的方法對(duì)同仁心Taq DNA聚合酶抗體的核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶殘留進(jìn) 行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果(圖5)表明同仁心Taq DNA聚合酶抗體無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶殘留;將同仁心Taq DNA聚合酶抗體進(jìn)行Tris-gly-SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳結(jié)果表明抗體純度高。
(6)臨床樣本外部測(cè)評(píng)
本組數(shù)據(jù)來(lái)自“F*”客戶(hù)，該客戶(hù)從事分子病理研發(fā)多年。實(shí)驗(yàn)室采用同仁心Taq DNA聚合酶抗體進(jìn)行測(cè)評(píng)，測(cè)評(píng)結(jié)果詳見(jiàn)圖6，結(jié)果顯示在低拷貝模板(100copies、10copies)條件下，同仁心Taq DNA聚合酶抗體組別在FAM、ROX通道均有較好表現(xiàn)，擴(kuò)增曲線的擴(kuò)增效率、線型較好。
